大鼠支气管哮喘模型气道重构的研究

四川医学２００２年５月第２３卷（第５期）Ｓｉｃｈ￣ｎ，￣ｔｅｄｉｃａ１．１ｏｕｒｎａｌ，２００２，Ｖ　２３…Ｎ　５　・４９７・　大鼠支气管哮喘模型气道重构的研究　殷晓峰，冯玉麟，刘春涛　（四川大学华西医院，四川成都６１　００４１）　【摘要】目的观察哮喘太鼠模型气道重构的病理特点和天琅猩红染色的应用厦优点。方法建立太鼠哮喘模型，　肺组把行ＨＥ、天琅猩红染色，镜下观察支气管平滑肌、胶原的病理改变。图像分析支气管平滑肌以厦胶原的厚度。结果　哮喘组反复许喘１周后出现管壁增厚、平滑肌增生、胶原增粗、增厚等气道重构的特征，２周组改变进一步加重。结论①　反复的变应原吸入可导致气道重构　＠苦味醢天糠猩红染色研究胶原纤维．圈皋清晰完整。　【关键词】哮喘　气道重构　天糠猩红染色　【中图分类号】Ｒ５６２．２　５　【文献标识码】Ｂ　【空草编号】１００４—０５０１（２００２）０５—０４９７—０２　气道重构是哮喘一特征病理变化。了解哮喘气道　重构的病理特点为进一步阐明哮喘发病机理和防治开　１．３统计学分析：各级问数据均以　±　表示，应用　ＳＰＳＳ１０．０统计软件统计分析，组间比较采用ｔ检验。　辟了一条新的思路　本文首先建立支气管哮喘气道重　构模型，观察支气管牯膜及平滑肌的改变，用苦味酸天　狼猩红染色观察胶原分布及沉积状况。　１材料与方法　１．４实验结果　１，４．１病理组织学所见：各组右中叶肺组织石腊切片　常规ＨＥ染色，光学显微镜观察：哮喘１周组支气管粘　膜增厚，肺泡隔增厚，气道平滑肌明显增厚，粘膜下、肺　泡问质见有大量嗜酸性细胞浸润。两周组上述病理改　变较１周加重。苦味酸天狼猩红染色偏振光显微镜观　１．１大鼠哮喘模型的建立；３２只Ｗｉｓｔｅｒ大鼠（四川大　学华西医学中心动物实验中心），体重２１０＿－４－２０ｇ，雌雄　不限，随机分成对照组和哮喘组，各组再分成ｌ周、２周　二个时间段观察　第ｌ天，哮喘组大鼠用２ｍｌ致敏混悬　液腹腔注射（ＯＶＡ１０ｒａｇ一美国Ｓｉｇｍａ公司，ＡＬ（ＯＨ）ｓ　干粉２００ｍｇ，灭活百日咳菌苗（６ｘ１０９个），使大鼠处　察可见：哮喘组支气管牯膜及上皮下Ｉ型胶原纤维呈　亮红色及橘黄色，有较强的双折射光，数量明显增多，　Ⅲ型胶原纤维呈绿色，沿上皮下与Ｉ型胶原交错分布　的双折射光，数量明显增多．Ⅲ型胶原纤维呈绿色，沿　上皮下与Ｉ型胶原交错分布　１．４．２各蛆支气管管腔内周长、平滑肌面积以及厚度　于致敏状态。第１　５天起连续每天超声雾化１　ＯＶＡ诱　喘．约３０分钟，直至大鼠出现气喘、咳嗽等哮喘样发　作。分别于第２ｌ天、第２８天处死大鼠。对照组在同一　时间予生理盐水干预　的比较：哮喘组支气管平滑肌明显较对照组增厚，诱喘　２周组较１周组更为明显，与对照组比较有明显统计学　意义（尸＜０．Ｏ５）。见表１。　表１实验组和对照组不同时段平滑肌厚度比较（１ａｍ．ｘ－４－ｓ）　１．２实验方法：末次激发结束后４～６小时内处死大　鼠　常规留取右肺中叶，１０　中性溶液固定，　ＨＥ染色。每张切片在显微镜下放大２００倍，确定完整　的支气管横截面　］，用图像采集系统（Ｎｉｋｏｎ８Ｌｓｐｏｔ，美　国），采集软件（Ｓｐｏｔ　ａｄｖａｎｃｅｄ，美国）采集图像，真彩　色医学图像分析软件Ｉｍａｇｅ—ｐｒｏ　ｐｌｕｓ（４，１．０．９版，Ｍｅ—　注；哮喘组（１周纽）ＶＳ对照组ｔｌ周组）．Ｐ＜Ｏ　Ｏ１，哮喘组（２局组）　ＶＳ对照组（２周组）．Ｐ＜０．０ｌ　ｄｉａ　ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ．Ｉ　．Ｐ，美国），测支气管基底膜周径　（Ｐｂｍ）、总管壁面积（ＷＡｔ）、内壁面积（ＷＡｉ）以及平　ｌ，４．２各组支气管间胶原厚度的比较：哮喘组上皮下　基底膜胶原沉积较对照组增厚，有明显统计学意义（Ｐ　＜０．０５），尤以诱喘２周组为著，见表２。　表２实验组和对照组不同时段肢原厚度比较（ｉｚｍ．￣４－ｓ）　滑肌面积（ＷＡｍ），并用Ｐｂｍ将测量值标准化，代表相　应管壁层的厚度　］　右肺中叶组织石蜡切片厚５／ｚｍ，参　考实验方法　行苦味酸天狼猩红染色。在偏振光显微　镜下（Ｉ　ｅｉｃａ　ＤＭＲ，德国。）观察支气管上皮下Ⅱ型、Ⅱ　型胶原纤维分布。ＤＣ２００（１ｅｉｃａ公司，德国）图像采集系　统，采集软件（ＩＭ一５０，１．２０版，ｌｃｉｃａ公司，德国）进行　图像采集，Ｉｍａｇｅ—Ｐｒｏ　ｐｌｕｓ真彩色医学图像分析软件，　测定胶原的厚度。　洼：哮喘组（１周组）ｖｓ对照组【ｌ周组）．尸＜ｏ．０１．哮喘组（２周纽）　ｖｓ对照组（２周组），Ｐ＜ｏ．０ｌ　维普资讯 http://www.cqvip.com

・４９８・　四川医学２００２年５月第２３卷（第５期）Ｓｗｋ￣ａｎＭｅｄｉｃａｌ　ｄ￣＊ｒｎａｌ，２００２．Ｖ　２３．Ｎｏ．５　２讨论　原反应，并增强胶原的双折光现象　故苦昧酸天狼猩红　偏振光法可揭示组织内的胶原类型和分布状态。胶原　可显示不同颜色、不同强度的双折光，因此可区分Ｉ、　Ⅱ、Ⅲ和ＩＶ型胶原“］。而免疫组化染色仅仅显示Ｉ、Ⅱ　型胶原纤维，并且只能是在不同切片上分别观察，不利　气道重构是包括呼吸道平滑肌细胞的增生肥大，　上皮细胞增生，上皮下纤维化，弹性蛋白破坏后细胞间　质的重塑和血管分布增多等一系列的病理变化　］。其　中气道平滑肌（ＡＳＭ）增厚是支气管气流阻塞和气道　高反应性的主要因素。Ｊａｍｅｓ等　观察到在肺容积与　气道大小被动性改变时，气道壁内周径（Ｐｉ）或基底膜　周径（Ｐｂｍ）仍相对保持不变，据此有助于对不同部位　与不同收缩程度的支气管进行较为准确的对比。本组　研究结果表明，哮喘模型组，支气管平滑肌经标化后其　厚度高于对照组，表明在轻度支气管哮喘或者在哮喘　早期即出现气道的重构，并非严重慢性病变的结果。本　组实验亦表明变应原诱喘两周组气道重构改变较一周　组明显。表明长期慢性炎症的刺激可造成支气管气道　重构加重，从而导致不可逆性的气道气流阻塞以及持　续性气道高反应性。　于病变的综合分析；而且操作费时，效果也不如天狼猩　红染色清晰。苦昧酸天狼猩红偏振光法可在一张切片　上同时显示Ｉ、Ⅲ型胶原纤维及其相互间的关系，可直　接观察分析纤维化的程度。　本研究表明支气管哮喘患者气道重构在哮喘早期　即发生，并随病程而加重，参与了哮喘的整个慢性炎症　过程。若能早期干预平滑肌增生、肥大以及胶原沉积等　过程，有可能减慢气道重构的发生发展，从而预防和减　慢哮喘的不可逆性气流阻塞。　参考文　献　１　Ｂａｉ　Ａ．ｔ＇ｔ“　．Ｐｒｏｐｏｓｅｄ　ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ　ｆｏｒ　ｑｕａｎｔｉｔｙｉｎｇ　ｓｕｂｄｉｖｉｓｉｏｎｓ　ｏｆ　在本实验中我们观察到：哮喘组上皮下基底膜胶　原的沉积明显比对照组增厚，尤其在过敏原干预两周　组。偏振光显微镜下观察到粗大的Ｉ型胶原明显增多，　在小气道基底膜的表达尤为明显。这与以往的报道相　似“］，提示在哮喘的慢性炎症发展过程中，气遭重构以　胶原增生明显为其特征，其中以外周小气道的发生最　早、最明显，说明哮喘外周气道改变可能更为重要。　由于胶原分子呈有序的平行排列，正常具有双折　光性，富含碱性氨基酸，可与酸性染料强烈的反应。而　天狼猩红（Ｓｉｒｉｕｓ　ｒｅｄ）是一种很强的酸性染料，能与胶　ｔｈｅ　ｂｒｏｎｃｈｉａｌ　ｗａＩＩ　Ｊ　Ａｐｐｌ　Ｐｈｙｓ　Ｅｏ［ｔｌ９９４、７７（２）；１０ｌ１　２　Ｊ㈣ＡＬ，　Ⅱ　Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ￣ｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｓｍｏｏｔｈⅢｃｌｅ　ｓｈｏｒｔ—　ｅｎｉｎｇ　ｉｎ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｐｉｇ　ｔｒａｃｈｅａ．』Ａｐｐｌ　Ｐｈｙｓｉｏ１．１９８７ｔ６３：１３６０　３张晶，等苦味酸天狼猩红偏振光往鉴别Ｉ型卫Ｉ型腔原纤维　中华病理学杂志．１　９９６，６．Ｚ５：１８０　４　Ｒｅｄｉｎｇｔｏｎ　ＡＥ．　ａ１．Ａｉｒｗａｙ　ｗａｌＩ　ｒｅｍｏｎｄｅｌｉｎｇ　ｉｎ　ａｓｔｈｍａ　Ｔｈｏｒａｘ．　】９９７　５２：３ｌ０　５　ＡＩｆｒｅｄｏ　Ｃｈｅｔｔａ　．Ａｉｒｗａｙ　ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ　ｉｓ　ａ　ｄｉｓｔ　Ｅｎｃｔｉｖｅ￣ｅａｔｕｒｅ　ｏｆ　ａｓｔｈｍａ　ａｎｄ　ｉｓ　ｒｅｔａｔｅｄ　ｔ０　ｓｅｖｅｒｉｔ　ｏｆ　ａｓｔｈｍａ．Ｃｈｅｓｔ，１９９７，１１１　６陈宁蒙　等．苦味酸天狼猩红和偏振光法对实验性矽肺腔原纤维的　研究中华病理学杂志，１９９３．２２：５３　甲硝唑过敏反应所致，立即停用甲硝唑，并以氢化可的　甲硝唑致严重过敏１例　王怀普　（沐川县＾民医院，Ｎ　Ｊ　ｒＪ沫川６１４５００）　　松２００ｍｇ静滴，ＩＩ服维生素Ｂ　，维生索　及赛庚啶，约　半小时后患者上诉症状逐渐减退并消失。　甲硝唑原用于抗阿米巴、滴虫药，现在发现具有广　谱抗厌氧菌作用，已广泛应用于临床各科特别是外科，　其不良反应多见于胃肠道症状，而致严重过敏的报道　较少。作为一种价廉物美的，具有确切临床疗效的药　患者，男，３７岁。因右下腹疼痛３天入院。既往无　类似病史。查体：生命体征平稳，右下腹压痛、反跳痛，　腹肌紧张。辅查：Ｂ超示右下腹炎性占位。血常规：　ＷＢＣ　ｌ１．１×１Ｏ。／Ｌ，Ｎ　０．７６。入院诊断：急性阑尾炎。　物，甲硝唑确实有较高的临床使用价值。在临床用药时　我们宜仔细询问患者药物过敏史，是否在应用甲硝唑　后会出现不良反应，而一旦出现不良反应特别是严重　以青霉素、妥布霉素、甲硝唑抗炎及支持对症治疗。在　输入甲硝唑液约５０ｍｌ后，患者突然出现胸闷、心慌，嘴　唇麻木，皮肤瘙痒，查心率ｎｏ次／分，律齐，呼吸急促，　双眼结膜水肿充血，嘴唇水肿，颈部皮肤斑疹。考虑系　过敏反应后，能正确认识并作出及时正确的处理，从而　避免一些可能出现的后果。