HPLC法测定维生素B2片的含量

June 2011, Vol.9, No.18Guide of China MedicineHPLC法测定维生素B2片的含量

李 静 蔡旭升 郭倩倩 龚琳琳 李秀梅（河南三门峡市食品药品检验所，河南 三门峡 472000）

【摘要】目的 采用高效液相色谱法测定维生素B2片的含量。方法 采用色谱柱为Diamonsi C18（250mm×4.6mm，5μm），以0.01mol/L庚烷磺酸钠的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇（85∶10∶5）为流动相，流速0.8mL/min，检测波长为444nm，进样量20µL。结果 维生素B2在0.11~0.91μg（r=0.9999）之间线性关系良好，维生素B2平均回收率为100.1%。结论 该方法精密度好，结果准确，可靠，灵敏，可用于维生素B2片的含量测定。

含量测定【关键词】高效液相色谱法；维生素B2片；

中图分类号：R914.1 文献标识码：B 文章编号：1671-8194（2011）18-00-02

维生素B2是机体中许多酶系统的重要辅基的组成成分，参与物质和能量代谢。维生素B2片用于预防和治疗维生素B2缺乏症，如口角炎、唇干裂、舌炎、阴囊炎、结膜炎、脂溢性皮炎等。中国药典2010年版二部中收载的维生素B2片含量测定方法为紫外-可见分光光度法[1]。本文对现行药典标准进行了提高，采用高效液相色谱法测定维生素B2片的含量，结果表明该方法准确可靠，重复性好，专属性强，可用于维生素B2片的含量测定。1 仪器与材料1.1 仪器岛津2010高效液相色谱仪；分析天平（1/10万，Mettler Toledo AG135）。1.2 材料维生素B2对照品（批号：100369-200301，购自中国药品生物制品检定所，含量98.7%）；维生素B2片（上海信宜黄河制药有限公下午4时最高，入睡后由于血液流动相对缓慢，血液黏稠度增加，若于此时加服降高血压药物，就会使血压进一步下降，易引起有脑动脉硬化的高血压患者形成脑血栓，故不宜在睡前服用。建议降高血压药根据药物半衰期在早晨7时一次给药，或上午、下午两次给药。2.5 糖皮质激素类肾上腺皮质激素在体内有昼夜节律，长期应用突然停药可能发生肾上腺功能不全，引起严重后果，导致肾上腺皮质功能和其他功能的昼夜节律紊乱，如果在体内血液中皮质激素的自然峰值时（早晨7~8时）一次性给药，则对脑下垂体促皮质激素释放的抑制程度要比通常平均分为3~4次的给药方法轻得多，因此，应将皮质激素的药物给药每日总量在每日或隔日的早晨一次性给药，达到更合理的用药目的，如用泼尼松、地塞米松等在肿瘤化疗前和控制某些慢性疾病时，采用隔日给药法，即把48h用药量在早饭后8时左右1次服用，其疗效较每日用药好，而且不良反应小。2.6 强心苷类心力衰竭患者对西地兰、地高辛等药物的敏感性以凌晨4时最高，比其他时间给药的效应高达40倍。因此，如果需要早晨注射强心苷药物时应减少剂量，否则易出现毒性反应。2.7 抗癌类根据有关资料和临床实践表明，上午10时是抗癌药物使用的最佳时间，因为癌细胞的DNA在每天上午10繁殖复制速度最快，晚上10时最慢，如：用抗癌药（阿糖胞苷）治疗白血病时最好是上午8~11时给药，而此时用药的毒性也最小。2.8 胰岛素降血糖药糖尿病患者有“拂晓现象”的特点，对胰岛素的敏感时间大约在早晨，若此时给予最低剂量，便可获得最满意的疗效，故胰岛素降血糖药的使用，在上午给药要比下午给药好。2.9 解热镇痛抗风湿阿司匹林在早晨服药的生物利用度较晚间服药者大，其体内消除速率慢，半衰期长，血药浓度高，建议早晨一次性服用。吲哚美辛上午7时口服可达最高血浓度，不达到峰值也较其他时间服药时快；如在19时服药，血药浓度峰值则较24平均值低20%。风湿、类风湿病患者常服吲哚美辛，不良反应较大，因此，为提高疗效减少不良反应，早晨剂量宜小，晚间剂量宜大。2.10 赛庚定、扑尔敏等抗过敏药物宜在早上7时服用，但用高空作业除外；贫血患者服用铁亮剂，傍晚服用比早晨服用的吸收率可增加一倍。3 结 论

时辰药理学是临床药学的重要组成部分，生物体的周期性、节律性在临床合理用药上有重要意义，临床医务工作者可以依据人体的生物节律和药物作用的时辰节律来选择最佳给药时间，确定给药方案，既可提高疗效，还可减少药物用量，并最大限度地减少不良反应的产生。因此，临床药学工作者应认真学习和总结时辰药理学的有关知识，把用药的时辰效应性与药物用药剂量、给药方法等看得同样重要，更好地指导和服务临床合理用药。参考文献

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中 国 医 药 指 南 2011 年 6 月第 9 卷 第 18 期 • 实验研究 •

55图1 对照品色谱图图2 空白辅料色谱图图3 供试品色谱图司，批号：100502、091204、101106）；甲醇、乙腈均为色谱纯，庚烷磺酸钠为高效液相色谱专用试剂，冰醋酸为分析纯，水为重蒸馏水。2 方法与结果2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsi C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.01mol/L庚烷磺酸钠的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇（85∶10∶5）；流速：0.8mL/min；检测波长：444nm；进样量20μL；柱温：30℃；在上述条件下理论塔板数为5000以上。2.2 对照品溶液的制备精密称取维生素B2对照品约11.4mg，置500mL量瓶中，加冰醋酸5mL，水200mL，置水浴上加热，并时时振摇使其溶解，加水适量稀释，放冷，再用水稀释至刻度，摇匀，即得（维生素B222.8μg/mL）。2.3 供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于维生素B210mg），置500mL量瓶中，加冰醋酸5mL，水200mL，置水浴上加热，并时时振摇使其溶解，加水适量稀释，放冷，再用水稀释至刻度，摇匀，即得。2.4 空白辅料溶液的制备按处方量取空白辅料适量，照样品溶液的制备方法制备空白辅料溶液，结果表明阴性对照品不干扰测定。见图1~3。图1为对照品色谱图，图2为空白辅料色谱图，图3为样品色谱图。2.5 线性关系考察精密吸取维生素B2对照品溶液（22.8μg/mL）5、10、20、30、40μL注入液相色谱仪，以峰面积积分值（Y）为纵坐标，以对照品进样量（X）为横坐标绘制工作曲线，得回归方程为Y=（5.86e-004）X+1.03e-003，r=0.9999。表明维生素B2在0.11~0.91μg之间呈良好的线性关系。2.6 精密度试验精密吸取对照品溶液20μL，重复进样6次，依法测定维生素B2峰面积，并计算相对标准偏差，结果RSD为0.25%，n=6，表明所建立方法精密度良好。2.7 稳定性试验取同一样品溶液20μL，分别在0、2、4、6、8h测定维生素B2峰面积。结果维生素B2RSD为0.93%，n=6。表明样品溶液在8h内稳定。2.8 重复性试验取同一批号（100502）供试品，依法平行制备6份供试品溶液，依法测定样品中维生素B2的峰面积，并计算维生素B2的含量和相对标准偏差，结果含量为98.7%，RSD为0.9%（n=6）表明方法重复性好。2.9 回收率试验精密称取维生素B2片处方量的80%，100%，120%的维生素B2对照品各3份，分别置预先按维生素B2的其他处方量的500mL量瓶中，按2.2项下方法制成供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定。低、中、高3种浓度的回收率（n=3）分别为100.2%（RSD=1.0%），99.5%（RSD=0.57%），100.5%（RSD=0.72%）；回收率平均值（n=9）为100.1%。2.10 样品含量测定取不同批号的3份样品，按2.3项下方法制成供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定维生素B2的含量。结果见表1。表1 样品含量测定结果（n=3）批号100502091204101106

含量98.7%97.3%95.4%

3 讨 论

3.1 维生素B2即核黄素，由核糖和异咯嗪构成；溶于水，但溶解度低（27.5℃，12mg/100mL）；对酸稳定，碱性条件下易分解破坏，故采取加入适量的冰醋酸，水浴加热，以增加其在水中的溶解度；因其对光敏感，紫外线可促进破坏，故在制备及及检验过程中均应注意避光。3.2 参照《中国药典》2010年版二部[1]维生素B2在444nm处有较好的吸收度。不同的流动相甲醇-0.1mol/L乙酸铵（甲酸调PH4.5）（25∶75）[2]、乙腈-0.1mol/L乙酸铵（甲酸调pH4.5）（60∶40）、0.01mol/L庚烷磺酸钠的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇（85∶10∶5）[1]进行试验，结果发现用流动相0.01mol/L庚烷磺酸钠的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇（85∶10∶5）时主峰的分离度，理论塔板数，拖尾因子等参数均符合要求。对于流速的选择方面，通过实验发现流速为1.0mL/min时，泵压力较大，故最终确定色谱条件为色谱柱：Diamonsi C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.01mol/L庚烷磺酸钠的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇（85∶10∶5）；流速：0.8mL/min；检测波长：444nm；进样量20μL；柱温：30℃。本品采用紫外-可见分光光度法进行含量测定，受辅料干扰较大；采用高效液相色谱法进行含量测定，检测灵敏度高，专属性强，是一种很好的测定方法。参考文献

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