MDA实验步骤

微量丙二醛（MDA）测定

1， 按照试剂盒说明书配制试剂

MDA含量测定与T-SOD活力测定用的血清是同一份。 2， 仪器的选择

1) 根据以下加样表加样

分光光度计 毫升 标准管 0.1 0.1 标准空白管 0．1 0.1 混匀 测定管 0.1 0.1 测定空白管 0.1 0.1 标准品 无水乙醇 测试样品 试剂一 试剂二 试剂三 50%冰醋酸 吸光度 MDA含量 3 1 0.077 3 1 0 8.052 3 1 0.062 3 1 0 旋涡混匀器混匀，管口用保鲜膜扎紧，用针头刺一小孔，95°C水浴40min，取出后流水冷却，532nm处测定吸光值

先用4mlEP管作为容器，反应完全后，移入比色皿中测量OD值

酶标仪 微升 标准管 5 5 标准空白管 5 5 混匀 测定管 5 5 测定空白管 5 5 标准品 无水乙醇 测试样品 试剂一 试剂二 试剂三 50%冰醋酸 吸光度 MDA含量 150 50 0.08543-A 150 50 0.07193-A 10.962 150 50 0.13776-A 150 50 0.12625-A 旋涡混匀器混匀，管口用保鲜膜扎紧，用针头刺一小孔，95°C水浴40min，取出后流水冷

标准管 标准空白管 测定管 测定空白管 却，532nm处测定吸光值(A蒸馏水=A)

先用0.5mlEP管作为容器，反应完全后，移取200μl至96T板中测量OD值

*实验部分结数据见表中红色数据

2）结果分析；1，与T-SOD活力检测结果类似，酶标仪所测得的MDA含量的值要稍微大一些， 但都相差不大，所以可以选择酶标仪

2,20μl血清量过大，需要进一步摸索取样的量。

3，最佳取样量第二次预试 1) 根据以下加样表加样 标准管 标准空白管 5 5 5 5 测定管—测定空白管 原血清 5 5 血清稀释一倍 5 5 5 5 血清稀释两倍 5 5 5 5 血清稀释三倍 5 5 5 5 标准品 无水乙醇 测试样品 试剂一 5 5 混匀 试剂二 试剂三 50%冰醋酸 150 50 150 50 150 50 150 50 150 50 150 50 150 50 150 50 150 50 150 50 95°C水浴40min 冷却后测532nm处的吸光值 吸光度 MDA含量 8.985985 4.40885 201.0084 -68.5724 2) 结果分析：加5μl的血清量得出的MDA含量合适，稀释倍数过大，MDA含量过少，不利于比较

3) 总结：统一选择5μl的原血样做为加样量

3， 血样按照以上方法处理后分装，取出一份待测，其余的先放入4℃后放入-80℃冷冻。再按以下加样表加样。

微升 编号 标准品 无水乙醇 测试样品 试剂一 1 2 5 5 n… 1 2 5 5 混匀 n… 5 5 5 5 试剂二 试剂三 50%冰醋酸 吸光度 150 50 150 50 150 50 150 50