《酶标分析仪》检定规程的修订

技术篇ｌ技术培训　《酶标分析仪》检定规程的修订　口谢宝民　ＪＪＧ８６１—２００７（（酶标分析仪》检定规程（以下简称“新　规程”）于２００８年５月２１日起实施。ＪＪＧ８６１—１９９４（＜酶标分　项目（换挡误差和测试速度及电源电压）：增加了“灵敏　度”和“通道差异”两项检定指标。　析仪》检定规程（以下简称“旧规程”）废止。新规程适应　当今酶标分析仪的发展现状，具有适用于酶标分析仪吸　四、检定条件部分　新规程取消了５４０ｎｍ干涉滤光片标准物质。对检定　的吸光度范围进行了下延和拓宽，增加了吸光度标称　值０．２和１．５的光谱中性滤光片标准物质。通常酶标分　析仪的吸光度测定范围在０～２．５之间即可以满足ＥＬＩＳＡ　光度和波长准确度检定用的标准物质．使规程与标准物　质相匹配，可确保计量检定工作的有效性　《酶标分析仪》检定规程本次修订遵循的原则：重要　指标必检，次要指标从简。主要的修订内容如下：　一的测定要求，而现在的酶标分析仪可测定的吸光度一　般在０～３．０之间，但不必刻意追求较宽的吸光度测定范　围，主要检定一定吸光度测定范围内的吸光度示值误　差即可。　、范围和概述部分　新规程扩大了适用范围，除用于检定外，还可用于　样机试验和型式评价中的计量性能试验：对仪器类别进　行了重新定义，旧规程将仪器类别分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ五　类，本次修订删除了Ｄ、Ｅ类，因为最小显示值的差异完　全可以通过增加的灵敏度指标予以考察：本次修订对　Ａ、Ｂ、Ｃ类仪器的内涵赋予了新的含义。　二、原理部分　五、检定项目和检定方法部分　新规程对吸光度准确度、吸光度重复性、波长准确　度、波长重复性等检定项目的测量方法进行了修改，增　加了通道差异和灵敏度检定项目及测量方法。　新规程将波长示值误差的检定定为仪器的首次　检定项目。理由：首先，若将检定干涉滤光片的分光光　度计（尤其是自动扫描式分光光度计）带到检定现场　酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）利用了抗体一抗原反应　的特异性、酶的标记原理和高效催化作用，因此，该实验　具有高度的特异性和灵敏性。酶联免疫吸附实验的操作　方法首先将抗原（或抗体）物质吸附（医学上称“包被”）　很不方便；其次，若不将分光光度计带到检定现场，需　要把干涉滤光片拆下来，拿到法定计量技术机构检　在样品板中（通用的样品板是９６：￣Ｌ反应板），再将待测样　品ｆ如血液等）加入样品板，于是待测未知的抗体（或抗　原）与包被的抗原（或抗体）相结合，成为抗体一抗原复　合物。当依次加入检测抗体或酶标二抗以及酶的底物时　便产生呈色反应，其程度与被检测样品中待测抗体（或　抗原）的量成正相关，据此可以得到定性或定量的检测　结果。因此，旧规程原理部分仅讲“酶与底物产生显色反　应”，而未将酶标分析仪测量对象明确，导致缺少表述主　体。新规程增加了“依据酶标记的免疫复合物与酶的相　定，检定完成后再将干涉滤光片取回并安装到酶标分　析仪上。这样的检定工作在实际操作中，执行起来有　些困难。因此。将其定为仪器首检项目。当然。检定员　手中若持有具备《制造计量器具许可证》的便携式高　精度分光光度计，则另当别论。　对于吸光度示值误差的检定，在新规程中规定以　４５０ｎｍ波长为主检波长，它是当前样品检测中主要使用　的波长。目前，ＥＬＩＳＡ试剂盒所使用的标记用酶多为辣　根过氧化物酶（ＨｒｔＰ），底物通常为四甲基联苯胺（ＴＭＢ）或　邻苯二胺（ＯＰＤ）。底物在过氧化氢溶液的存在下，经ＨＲＰ　催化，分别氧化为２，２，一二氨基偶氮苯（ＤＡＢ）和联苯醌。　当ｐＨ＝５时，ＤＡＢ在４５０ｎｍ波长处有最大吸收。当ｐＨ＝ｌ　时，最大吸收波长移至４９２ｎｍ，同时，摩尔吸光系数变　大，显色加深。因此，４５０ｎｍ和４９２ｎｍ两个波长是目前　ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ　ｃｈｉｎａｊ　ｌｃｏｒｎ　ｃ　应底物能够产生显色反应”这样的表述　三、技术要求部分　新规程将“技术要求”改版为一览表，使检定员和仪　器使用者对“技术要求”一．清二楚，并指出了首次检定、　后续检定和使用中检验应做的项目：取消了非主要检定　１２０日墨曩盈　维普资讯 http://www.cqvip.com

技术培训Ｉ技术篇　ＥＵＳＡ测定最常用的。通常，酶标分析仪同时安装４～８片　滤光片，一般均包括上述两个波长。有的酶标分析仪以　则不易被发现，因此我们采用浓度为５ｍｇ／Ｌ￣Ｊ酶标分析　仪检定用灵敏度溶液标准物质测量吸光度值，对仪器　的检测器质量进行检定，以保证仪器测量结果的可靠　性。　４９０ｎｍ滤光片替代４９２ｎｍ滤光片，影响不大。除了这两个　基本滤光片外，考虑到双波长测定需要参比波长，还需　要４０５ｎｉｎ和６２０ｎｍ或６３０ｎｍ波长的滤光片。酶标分析仪　的使用者一般情况下都要用到４０５ｎｍ、４５０ｎｍ、４９２ｎｍ　新规程增加了“通道差异”指标。为了提高酶标分　析仪的检测速度，根据９６孔酶标板的规格特点，目前，大　（或４９０ｎｍ）及６２０ｎｍ（或６３０ｎｍ）这４块滤光片或其中的　多数生产厂家生产的酶标分析仪均采用多通道（８通　某几块滤光片。因此，计量检定围绕这４块滤光片进行。　道）的检测器（部分酶标分析仪目前仍采用单通道）。　此外，将旧规程的分别测量操作方式更改为同时测量，　因而它们每个通道的检测能力不尽相同，它是仪器内　节省了测量时间。　部的系统误差。质量不同的检测器对吸光度测量标准　吸光度重复性的检定，在新规程中用两块光谱中性　的响应能力不同，所以通道差异是衡量酶标分析仪性　滤光片（固体标准物质）代替了重铬酸钾溶液。因为对　能良好与否的重要指标之一；其衡量指标用极差表　酶标分析仪而言，吸光度考察的对象是仪器的光源电　示，极差值越小，通道差异也就越小，说明同一样品在　路和信号通路，它们的稳定与否和所测对象是固体还　不同通道检测结果的一致性越好。“通道差异”将是市　是液体无关，单光束紫外一可见分光光度计和可见分光　场占有率越来越高的全自动型酶标分析仪的最主要　光度计均采用固体标准物质做重复性检定。　误差来源，“通道差异”应该是今后检定中的重点检定　新规程增加了“灵敏度”指标。因为仪器的灵敏度　指标。　主要受两个因素的影响：一是滤光片的波长准确度；二　注：作者为ＪＪＧ８６１一ａｏｏ７＜＜酶标分析仪》检定规程　是检测器的质量。通常情况下，由滤光片导致仪器的灵　的主要起草人。　敏度和准确度下降比较容易检查，而检测器质量差异　作者单位【中国计量科学研究院】ｌｉｊ　（上接第１１９页Ｊ　无法传输时才使用。先将数字显示仪表的设置开关拨至　二、数字显示仪表的更换与程序输入　设置位上进入配置菜单，并利用４个方向键进行菜单选　当数字显示仪表损坏需要更换时，首先需确认新仪　择，按使用要求输入合适的参数。并可根据实际情况进　表的电源电压与原电压是否一致，如不一致则要利用仪表　行针对性的修改。修改时，可利用左右键查找可选项或　内部的电源跳线，将电源调至与现有电源电压相同的位置　利用数字键输入。　上。数字显示仪表更换完后，需要重新输入程序数据。输入　三、电子秤的标定及调整　程序数据的方法有软件输入及人工手动输入两种。　当更换数字显示仪表或传感器等元器件以及其他　１．利用软件传输程序数据　原因造成称量不准确时，在排除故障后都要对电子秤的　利用软件传输程序数据，这是最简单且最有效的一　零点和称重进行标定调整。具体步骤如下：　种方法。首先，在计算机内应储存与数字显示仪表匹配　（１）先将数字显示仪表的设置开关拨至设置位，进入　的软件程序。其具体的传输方法如下：　配置菜单，按左右键进入ＣＡＬＩＢＲＴ。　（１）确保数字显示仪表与计算机的通讯连接可靠，　（２）连续按向下键进入ＣＨＡＮ１、ＷＥＩＧＨＴ、ＷＺＥＲＯ　并将数字显示仪表的设置开关拨至设置位上。　后。再按向下键清除数值并确定，产生一个新的参数，退　（２）打开计算机，找到所用软件并打开。　回上一级菜单标零完毕。　（３）在弹出的窗口中选择下载文件到指示器的命令。　（３）按向上键回到ＷＺＥＲＯ。按向左键进入ＷＶＡＬ，　（４）在弹出的窗口中选择或键入下载的路径并确定。　再按向下键清除数值并输入砝码重量。　（５）在弹出的窗口中选择通讯口并确定。　（４）按向上键回到ＷＶＡＬ，按向左键进入ＷＳＰＡＮ，再　（６）文件开始传输，传输完毕后单击任意键返回，再　按向下键并手动提起砝码。当砝码完全提起后回车确　单击退出完成数据传输。　认，产生一个新的参数，退回上一级菜单并放下砝码，标　２．人工手动输入程序数据　重完毕。　人工手动输入程序数据较为繁琐，只有在采用软件　作者单位【江苏省无锡市计量测试中心】ｃｉｉ